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Developability Evaluation of Single-Domain Antibody-Chelator Conjugates for Diagnostic Radiotracers
用于诊断性放射性示踪剂的单域抗体-螯合剂偶联物的可开发性评估
Philipp D. Kaiser, Simon Straß, Sandra Maier, Evgenia Herbold, Bjoern Traenkle, Anne Zeck
Antibodies 2026, 15(2), 22, doi:10.3390/antib15020022
可开发性评估框架可降低抗体药物开发中的风险。作者指出,由于单域抗体(sdAbs)体积更小、表面电荷分布不同且缺乏 Fc 区,现有方法不易直接适用于 sdAbs。他们建立了一套用于评估 sdAbs 及其偶联物可开发性的策略。
该案例研究包含两个临床候选分子,拟作为临床成像诊断性示踪剂生产的前体。作者用完整质量 LC-MS 分析及胰蛋白酶肽图相对定量来考察抗体框架区完整性和互补决定区(CDR)稳定性;用纳米差示扫描荧光法(NanoSDF)考察结构完整性;用体积排阻色谱-紫外检测(SEC-UV)考察抗原结合能力;用 LC-MS/MS 螯合测定考察螯合能力。
在肽图分析中,将应激处理样品和参比样品进行胰蛋白酶酶解,然后用 LC-MS/MS(Thermo Orbitrap Eclipse,DDA 模式)分析。作者使用包含 sdAbs 的自建蛋白质数据库,并用 Mascot Server 3.0 鉴定肽段。为鉴定极短肽段,他们将最小肽段长度设为 4 个氨基酸残基,并使用 Mascot 容错搜索,该搜索包括半特异性序列和非预期修饰。修饰还用 Thermo BioPharmaFinder 进行了额外定量。例如,一个 sdAb 候选分子表现出明显的 CDR 局限型不稳定性,其碎片离子谱确认了琥珀酰亚胺的形成。
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